進行抗體定制時,如何確定合適的抗體亞型?
日期:2025-11-10 15:58:28
抗體亞型需結合檢測場景、效應功能需求、靶點特性及實驗兼容性綜合確定,不同亞型在結合活性、效應功能和應用適配性上差異顯著。
一、優先明確核心應用場景
體外檢測(ELISA、WB、IHC等):優先選親和力高、穩定性強的亞型,如人源IgG1、鼠源IgG1或IgG2a,這類亞型在固相載體上結合穩定,非特異性背景低。
體內治療/功能研究(中和、ADCC/CDC效應):需匹配效應功能需求,比如需要介導細胞殺傷選IgG1(人源)、IgG2a(鼠源),需低效應功能選IgG4(人源)。
流式細胞術:選能高效結合熒光素標記二抗、不影響靶點構象的亞型,如鼠源IgG1、IgG2b,避免亞型與二抗不匹配導致信號偏弱。

二、匹配靶點特性與效應功能需求
中和抗體需求:優先選能有效阻斷靶點結合位點的亞型,如鼠源IgG1、人源IgG1,這類亞型的抗原結合區構象更易適配靶點阻斷。
效應功能依賴(ADCC/CDC/吞噬):人源優先IgG1(強ADCC/CDC)、IgG3(強補體激活);鼠源優先IgG2a(強ADCC)、IgG2b(中等效應功能)。
低效應功能需求(避免脫靶損傷):人源IgG4(效應功能弱,不易引發免疫反應)、鼠源IgG1(部分種屬中效應功能較弱)。
三、考慮實驗兼容性與物種適配性
二抗匹配:確認實驗室現有二抗的亞型特異性,比如現有鼠抗人IgG1二抗,就優先定制人源IgG1亞型,避免額外采購專用二抗。
物種交叉反應:跨物種檢測時,選在目標物種中免疫原性低、交叉反應少的亞型,如人源化抗體優先保留IgG1框架,減少動物體內免疫排斥。
穩定性要求:極端條件(如高溫、高鹽)下檢測,選結構穩定的亞型,如IgG2(人源/鼠源),其鉸鏈區更堅固,抗降解能力強。
四、參考同靶點已驗證亞型
查閱文獻或數據庫,了解相同靶點在類似應用中已成功使用的亞型,可大幅降低定制風險,比如腫瘤靶點的中和抗體多采用人源IgG1。
若為全新靶點,可先篩選多個亞型(如IgG1、IgG2a、IgG4)的候選抗體,通過親和力、功能活性檢測確定最優亞型。






