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抗體定制若需針對特定修飾位點,需額外提供什么信息?

日期:2025-12-03 10:11:31

    針對特定修飾位點(如磷酸化、甲基化)進行抗體定制時,除了常規抗體定制所需信息外,還需額外提供修飾位點的精準特征信息及相關特異性驗證需求,具體如下:
 
1、修飾位點的精準分子信息
    位點的具體位置:需明確修飾氨基酸在靶蛋白序列中的準確編號(如人源EGFR蛋白的Tyr1068磷酸化位點),同時提供靶蛋白的完整氨基酸序列或UniProt等權威數據庫的蛋白編號,便于定制方定位靶點。
    修飾類型的具體亞型:同一類修飾存在不同亞型,需明確具體類型,例如甲基化需區分單甲基化、雙甲基化、三甲基化(如組蛋白H3K4me1/me2/me3),磷酸化需明確磷酸化的氨基酸種類(Ser/Thr/Tyr),乙酰化需標注乙酰化的具體賴氨酸位點等。
    修飾位點的周邊序列:提供修飾位點上下游5~15個氨基酸的序列片段(即抗原表位的側翼序列),因為周邊序列會影響抗原的空間構象和抗體的特異性,定制方可據此設計更精準的免疫原。
 
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2、靶蛋白的物種與樣本背景信息
    物種來源:明確靶蛋白的物種(如人、小鼠、大鼠、植物等),避免定制的抗體出現物種交叉反應干擾,同時需說明是否需要抗體識別跨物種的同源修飾位點。
    樣本類型:告知后續抗體將應用的樣本類型(如細胞裂解液、血清、組織切片等),以及樣本中是否存在同源蛋白或高豐度雜蛋白,便于定制方在抗體篩選時模擬實際檢測背景。

3、特異性驗證的具體要求
    非修飾位點的區分需求:需明確是否要求抗體嚴格區分修飾型與非修飾型靶蛋白(如僅識別磷酸化EGFR,不識別未磷酸化的EGFR),以及是否需要排除其他位點修飾的交叉反應(如避免識別EGFRTyr1173磷酸化位點的抗體與Tyr1068位點交叉結合)。
    同類修飾的區分需求:若靶蛋白存在多個同類型修飾位點,需說明是否需要抗體僅識別特定位點(如組蛋白H3K9me3抗體不與H3K27me3交叉反應)。
    應用場景的驗證要求:提供后續抗體的具體應用場景(如ELISA、WB、IHC、IP等),定制方可針對性開展驗證,確保抗體在目標場景下對修飾位點的識別能力。

4、其他輔助信息
    若有該修飾位點相關的已知結構數據(如晶體結構、構象信息),可同步提供,幫助定制方優化免疫原設計;
    若存在已有的失敗定制案例(如之前定制的抗體特異性不足),可說明具體問題,便于定制方規避同類缺陷。