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ENPP3(CD203c):ENPPs核苷酸代謝胞外酶,能量代謝調控者、變態反應標記物、腎癌RCC治療在研靶點!

日期:2023-09-20 13:54:04

最近,美國Xencor公司推出臨床藥物AGS-16M8F12(ENPP3 x CD3),一款針對ENPP3的雙特異性抗體藥物,旨在評估其在轉移性腎細胞癌(RCC)患者中的安全性、藥代動力學和推薦劑量。膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶(ENPPs)家族是近年備受研究者關注的一類胞外酶。ENPP1已有廣泛文獻和臨床研究,相比之下,ENPP3的國內外研究報道較為有限。然而,陸續的研究成果逐漸揭示ENPP3在能量代謝和變態反應等生理過程中具有重要作用。特別是在腫瘤治療領域,靶向ENPP3已展現出巨大潛力。因此,深入研究ENPP3可能揭示新的生理機制,為相關疾病的診斷和治療提供創新性方法!


1. 什么是膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族(ENPPs)?

膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族(Ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase, E-NPPs/ENPPs)是一組在哺乳動物體內具有相似結構的膜蛋白。目前共發現該家族的7個成員(ENPP1~ENPP7)。該家族名稱的由來是因為最初發現的ENPP1ENPP2ENPP3均具有水解核苷酸及其衍生物的焦磷酸酯鍵/磷酸二酯鍵的活性。而進一步的研究表明,ENPPs的一些成員還具有重要的磷脂酶活性。ENPP4ENPP5ENPP6則是在大規模測序時發現的未知功能蛋白,根據其與ENPPs的結構同源性而將其列入該家族。近幾年來,有關ENPPs在多種生理病理過程中復雜機制的研究已取得很大進展,它們參與的很多病理過程與其胞外作用有關,這使得它們成為治療相關疾病的潛在靶標 [1-3]


2. 什么是ENPP3?

2.1 ENPP3的結構

ENPP3(又名CD203c或NPP3)屬于膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族蛋白成員(ENPPs)。ENPP3最初被命名為Gp130RB13-6,它可以識別一類中度表達的酸性神經膠質纖維蛋白亞類,這類蛋白通常存在于大鼠神經膠質母細胞中。ENPP3基因位于人類染色體6q23.2-q23.3區域。ENPPs的氨基酸序列具有較高的同源性,目前研究較為清楚的NPP1、NPP2、NPP3屬于一個亞家族,它們是Ⅱ型膜蛋白,這3個成員均含有一個短的細胞內N端、單一的穿膜區和1個較長的胞外區,胞外區包含有2個生長調節素B樣結構域、1個保守的磷酸二酯酶樣催化結構域、1個核酸酶樣序列和1個EF-手象的Ca2+結合模體 (圖1[5-6]

2.2 ENPP3的表達和功能

ENPP3在人體的前列腺、子宮、結腸、嗜堿性粒細胞、肥大細胞、祖細胞,以及某些腫瘤中表達。雖然在人的肝臟、胰腺和腸道中未檢測到ENPP3的表達,但在大鼠的這些組織中均已發現。ENPPs這些酶的核苷酸底物可以觸發P2X離子通道受體/P2X嘌呤受體(如P2RX1P2RX2P2RX3P2RX4P2RX5、P2RX6、P2RX7)和某些G蛋白偶聯受體/P2Y嘌呤受體(如P2RY1P2RY2、P2RY3、P2RY4P2RY5P2RY6、P2RY7、P2RY8, etc.)。這些P2X和P2Y受體家族在許多生理和病理過程中發揮關鍵作用 [7-10]

ENPP3作為調節嘌呤代謝的胞外酶,其關鍵功能之一是抑制肥大細胞和嗜堿性粒細胞在慢性炎癥和過敏反應中的活性。值得注意的是,也有研究認為ENPP3與人類多種癌癥的發病可能存在關聯,尤其是腎細胞癌。盡管在國內報道非常少,但國外的研究陸續證明ENPP3與過敏反應和腫瘤的發生發展密切相關。因此,ENPP3有望成為多種過敏反應的診斷標志物或腫瘤治療的重要靶點 [7-10]

ENPP3的結構

圖1. ENPP3的結構 [6]


3. ENPP3相關的信號機制

3.1 ENPP3在能量代謝中的機制

ENPPs作為一種能夠水解細胞外核苷酸的酶,在能量代謝和細胞外信號傳導方面扮演著重要的角色。一項研究通過動力學分析揭示了ENPP3抑制GnT-IX(GnT-Vb)的機制。GnT-IX是一種糖基轉移酶,在糖基化(glycosylation)過程中發揮重要作用。GnT-IX(GnT-Vb)酶在進行糖基化反應時需要使用UDP-GlcNAc這個底物。UDP-GlcNAc提供了所需的糖分子GlcNAc,這些分子將被GnT-IX(GnT-Vb)酶轉移到其他分子上,形成復雜的糖鏈結構,從而影響蛋白質穩定性、細胞識別、信號傳導和細胞黏附等多個生物學過程 [12]

然而,在研究中發現,ENPP3酶可將UDP-GlcNAc分解為UMP(尿苷酸單磷酸)。當UMP與UDP-GlcNAc競爭性結合GnT-IX(GnT-Vb)時,UMP會占據GnT-IX(GnT-Vb)酶需要使用的底物位置。這意味著,GnT-IX(GnT-Vb)不再能夠有效地與UDP-GlcNAc結合。因此,ENPP3通過分解UDP-GlcNAc,使得GnT-IX(GnT-Vb)酶的活性降低 (圖2[12]

ENPP3介導的UDP-GlcNAc水解

圖2. ENPP3介導的UDP-GlcNAc水解 [12]

3.2 ENPP3在變態反應中的機制

FcεRI(IgE Fc受體,Fc epsilon receptor I)是一種免疫受體,主要功能是介導變態反應。FcεRI與免疫球蛋白E(IgE)分子相互作用,并在特定類型的免疫細胞上表達,主要包括嗜堿性粒細胞(basophils)和肥大細胞(mast cells) [13]。當FcεRI交聯可引發即時或慢性過敏性炎癥,然而其具體機制仍然不清楚。

有關研究發現,FcεRI交聯引發的ENPP3表達在慢性過敏性炎癥中起關鍵作用。在ENPP3基因缺陷小鼠中,嗜堿性粒細胞和肥大細胞增多,血液中的三磷酸腺苷(ATP,Adenosine Triphosphate)濃度增高,使得它們更容易患慢性過敏性疾病。此外,FcεRI交聯會導致這些細胞釋放ATP,但在ENPP3−/−的細胞中,ATP清除能力減弱,導致ATP在細胞內積聚,觸發過敏性炎癥。因此,ENPP3可以減少ATP濃度并降低嗜堿性粒細胞和肥大細胞的活性,以抑制過敏性炎癥(圖3[14]

ENPP3抑制依賴于ATP的過敏性炎癥

圖3. ENPP3抑制依賴于ATP的過敏性炎癥 [14]


4. ENPP3在各種過敏和腫瘤等疾病中的作用

4.1 ENPP3與過敏

4.1.1 嗜堿粒細胞ENPP3與過敏

嗜堿粒細胞和肥大細胞是參與變態反應的重要細胞。由于肥大細胞存在于組織中,而嗜堿粒細胞存在于血液循環中,因此,嗜堿粒細胞成為近年體外研究變態反應的突破點。CD63和ENPP3(CD203c)是目前發現嗜堿性粒細胞靈敏度和特異性最高的表面活化標記物 [15-16]

研究發現,激活狀態下,嗜堿粒細胞的ENPP3(CD203c)表達明顯上升,其診斷特異度和靈敏度高于CD63。過敏性哮喘患者在粉塵螨刺激后,嗜堿粒細胞的CD203c和CD63熒光強度顯著增加 [17];在乳膠和昆蟲毒液過敏的診斷中,檢測CD203c與CD63同樣可靠,但對于蜜蜂和黃蜂過敏患者,CD203c的靈敏度更高 [18-20];堅果過敏患者接受奧馬珠單抗(Omalizumab)治療后,嗜堿粒細胞的CD203c表達水平降低,表明奧馬珠通過阻斷IgE與嗜堿性粒細胞表面受體(FcεRI)結合來抑制嗜堿性粒細胞的活化 [21]

另有研究發現,通過使用CRTH2-FlTC、CD203c-PE和CD3-Per-CP這三種抗體,可以檢測嗜堿粒細胞表面的ENPP3(CD203c)表達水平,從而判斷蕁麻疹患者的血清是否能激活嗜堿粒細胞 [22]。蕁麻疹患者的血液中存在自身抗體,導致組胺釋放活性增加,其中大多數抗體是針對高親和力IgE受體(FceRl)的自身抗體,也有少數是針對IgE或其他抗體的。這些研究有助于我們了解慢性蕁麻疹的發病機制。總的來說,ENPP3(CD203c)在不同過敏性疾病的診斷和治療中具有重要的潛力。

4.1.2 肥大細胞ENPP3與過敏

肥大細胞表達ENPP3(CD203c)分子,這一發現較晚引起關注。相關研究揭示,人臍帶血來源的CD34+造血干細胞培養的肥大細胞和人胃腸道中的肥大細胞都有ENPP3(CD203c) [23-24]。此外,肥大細胞增多癥患者的肥大細胞,CD203c表達上調 [23-24]。因此,ENPP3(CD203c)可能是診斷肥大細胞相關疾病的標志物。

相關研究還發現,抗腫瘤藥物米哚妥林(Midostaurin)能夠抑制人臍帶血來源的肥大細胞和人血液中嗜堿性粒細胞釋放介質,但不能抑制嗜堿性粒細胞上IgE依賴的ENPP3(CD203c)上調。此外,IgE交聯會使肥大細胞增多癥患者的肥大細胞CD203e上調,但不影響干細胞因子(SCF)水平 [25-27]。此外,一氧化碳釋放分子CORM-3有強大的抗炎作用,但也會促進肥大細胞組胺釋放和ENPP3(CD203c)表達 [28-29]

4.2 ENPP3與腫瘤

ENPP3被認為是一種腫瘤標志物,尤其在腎細胞癌(RCC)領域得到較多關注。在RCC中,ENPP3的表達明顯升高,使其成為新型抗體藥物偶聯物(ADC)的潛在治療靶標。這些ADC藥物研究包括AGS-16M8F和AGS-16C3F,它們結合了抗ENPP3抗體和毒性有效成分MMAF,能夠特異性地識別和摧毀RCC細胞,同時表現出持久的抗腫瘤活性和可控的不良反應。因此,探索新一代抗ENPP3抗體ADC藥物,可能為治療轉移性腎細胞癌提供新的治療途徑 [30]

在卵巢癌中,有研究提示,卵巢子宮內膜異位瘤中胞外酶ADA、ALP、ENPP1和ENPP3可作為子宮內膜異位癥的候選生物標志物 [31]。在結腸癌細胞中,ENPP3高表達,且與腫瘤細胞的發生和轉移有關 [32-33]。雖然ENPP3在多種癌癥中起著重要作用,但關于抑制ENPP3的藥物研究很有限。現有的抑制劑大多是核苷酸衍生物,但它們在人體內的表現不符合藥物應有的性質(如吸收、分布和排泄),因為它們可以在體內分解并產生一些可能對嘌呤受體產生影響的代謝產物,而不是如預期般有效地抑制ENPP3酶的活性。因此,需要進一步研究ENPP3在腫瘤中的機制,以尋找更有效的抑制劑 [34-35]

4.3 ENPP3與其它疾病

ENPPs異常表達可能導致骨質礦化異常以及其他代謝性疾病的發生。例如,增加1,25(OH)2D水平可能通過維生素D受體(Vitamin D Receptor,VDR)在成熟成骨細胞和/或骨細胞上的作用,提高局部骨質礦化抑制因子(如Enpp1、Enpp3和Ank)的水平 [36];ENPP3和GRIA2之間存在直接的物理相互作用,可能影響血管平滑肌細胞(Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs)的鈣信號和MAPK信號傳遞 [37]

此外,在皮球囊擴張血管成形術(Percutaneous Transluminal Angioplasty,PTA)術后的動脈中,ENPP3和GRIA2的表達水平顯著上升,與再狹窄的嚴重程度相關 [37]。ENPP3還參與調節呼吸道上皮的液體平衡,可能在肝臟中調節膽汁的形成和腦脊液的分泌。膽汁在肝臟中的形成和排泄對脂質代謝和胰島素敏感性等方面都具有重要影響。因此,針對ENPP3抑制劑的研發可能有助于預防糖尿病 [38]


5. ENPP3的臨床研究前景

ENPP3是一種廣泛參與核苷酸循環、磷脂信號調控、細胞運動和細胞增殖等多種生理過程的分子,其在變態反應疾病和腫瘤中的作用和價值正受到越來越多的關注。目前,已有一種靶向ENPP3的ADC抗體藥物AGS-16M8F正在進行I期臨床試驗,用于治療轉移性腎細胞癌(RCC),目前尚未公布臨床結果。此外,ENPP3(CD203c)標記的嗜堿性粒細胞激發試驗處于廣泛的臨床驗證階段。與CD63一樣,CD203c標記的嗜堿性粒細胞激發試驗或可用于診斷慢性蕁麻疹以及食物過敏等變態反應疾病。因此,ENPP3在變態反應疾病領域以及腎癌等腫瘤中的研究頗具前景,可能為相關患者帶來新的治療選擇和機會。

為鼎力協助科研和藥企人員針對ENPP3在能量代謝、變態反應、腫瘤相關疾病中的臨床應用研究,CUSABIO推出ENPP3活性蛋白(CSB-MP4278MOVCSB-MP007681HU),助力您在ENPP3機制方面的研究或其潛在臨床價值的探索。

華美CUSABIO ENPP3 蛋白

Recombinant Macaca fascicularis ENPP3, partial (Active)

High Purity Validated by SDS-PAGE
CSB-MP4278MOV SDS-PAGE

The high purity is greater than 95% as determined by SDS-PAGE.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA
High Purity Validated of CSB-MP4278MOV

Immobilized Macaca fascicularis ENPP3 at 2 μg/ml can bind Anti-ENPP3 recombinant antibody (CSB-RA007681MA1HU), the EC50 is 3.313-4.724 ng/mL.

Recombinant Human ENPP3, partial (Active)

High Purity Validated by SDS-PAGE
CSB-MP4278MOV SDS-PAGE

The high purity is greater than 95% as determined by SDS-PAGE.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA
High Purity Validated of CSB-MP4278MOV

Immobilized Human ENPP3 at 2 μg/ml can bind anti-ENPP3 recombinant antibody (CSB-RA007681MA1HU), the EC50 is 2.151-2.492 ng/mL.

華美CUSABIO ENPP3 抗體

ENPP3 Recombinant Monoclonal Antibody

CSB-RA007681MA1HU FC

Untransfected and transfected HEK293T cells were stained with anti-ENPP3 antibody and analyzed using flow cytometry with FITC-labeled anti-Human IgG Fc antibody.

華美CUSABIO ENPP3 穩定細胞系

HEK293T/Human ENPP3 Stable Cell Line

CSB-SC007681HU FACS

Untransfected and transfected HEK293T cells were stained with anti-ENPP3 antibody and analyzed using flow cytometry with FITC-labeled anti-Human IgG Fc antibody.


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