ELISA試劑盒選擇原則及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

目前市場(chǎng)上的 ELISA 試劑盒質(zhì)量參差不齊，試劑盒數(shù)以千計(jì)，供應(yīng)商的科研實(shí)力也相差懸殊，試劑盒的質(zhì)量好壞會(huì)嚴(yán)重影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要。

以下為歸納ELISA試劑盒選擇需考慮的要素，供科研朋友們參考。

1. 十大選擇原則

1.1 基于研究物種選擇

如果樣品來(lái)自經(jīng)典模型，如人、小鼠和大鼠，則可以相對(duì)輕松地找到經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的ELISA試劑盒。但如果樣品來(lái)自猴子等非經(jīng)典模型，則可獲得的商品ELISA試劑盒數(shù)量有限。

如果要檢測(cè)這些物種的指標(biāo)，最好要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

1.2 基于分析目的選擇

ELISA是一種可用于定性和定量分析的工具。定性ELISA為樣品提供簡(jiǎn)單的陽(yáng)性或陰性結(jié)果，而定量ELISA通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線反映樣品中分析物的濃度。您想要量化樣品中的分析物還是僅檢測(cè)樣品的存在與否？根據(jù)分析目的，您可以選擇定性ELISA或定量ELISA。

1.3 基于檢測(cè)樣本選擇

大多數(shù)商業(yè)ELISA試劑盒在血清/血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中得到驗(yàn)證。請(qǐng)務(wù)必詳細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，以確保該產(chǎn)品與樣品兼容。此外，其他因素如溶血和樣品中脂質(zhì)的存在會(huì)干擾分析性能。因此，在選擇ELISA試劑盒之前，請(qǐng)考慮這些因素。建議對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證試劑盒是否合適且對(duì)樣品是否敏感。

1.4 基于檢測(cè)范圍選擇

試劑盒的檢測(cè)范圍就是標(biāo)曲范圍，特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi)，對(duì)于濃度很高的樣本，可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。

在此之前，我們可以通過(guò)NCBI的文獻(xiàn)，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參考值來(lái)比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致。

1.5 基于樣本量選擇

商業(yè)化試劑盒的樣品用量通常需要10μL至100μL, 如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少，最好選擇需要較少量樣品的ELISA試劑盒。

1.6 基于文獻(xiàn)引用選擇

產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用特別是高質(zhì)量的 SCI 文章的引用是很多客戶都關(guān)心的問(wèn)題，這是業(yè)界對(duì)產(chǎn)品認(rèn)可的一個(gè)非常重要指標(biāo)，而且對(duì)相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。

CUSABIO試劑盒的客戶引用文獻(xiàn)，目前已達(dá)10,000余篇，并以每年數(shù)百篇的數(shù)量在增長(zhǎng)。

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1.7 基于售前售后服務(wù)選擇

在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)條件下，服務(wù)理念已逐漸被企業(yè)家所重視，企業(yè)的營(yíng)銷(xiāo)環(huán)境發(fā)生了巨大的變化，高科技的廣泛應(yīng)用，信息高速流動(dòng)，產(chǎn)品硬件標(biāo)準(zhǔn)趨同。對(duì)客戶所能提供的技術(shù)支持服務(wù)、問(wèn)題處理的及時(shí)性、客戶的滿意度等也是選擇產(chǎn)品的考慮因素。

1.8 基于美譽(yù)度選擇

一個(gè)品牌不光要有知名度，更重要的是美譽(yù)度。從同行或?qū)嶒?yàn)室同僚了解供應(yīng)商的口碑，也通過(guò)行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò)，相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的ELISA試劑盒供應(yīng)商，在一定程度上可以反映產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題。

1.9 基于成本預(yù)算選擇

國(guó)際公認(rèn)的知名品牌一般質(zhì)量可靠，文獻(xiàn)引用多。但國(guó)際品牌由于進(jìn)口和國(guó)際運(yùn)輸?shù)瘸杀据^高，因此售價(jià)也較高。其實(shí)優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)品牌也是不錯(cuò)的選擇，因省去不少物流和報(bào)關(guān)費(fèi)用，與國(guó)外進(jìn)口試劑盒相比價(jià)格上有較大的優(yōu)惠，而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格, 如48T小包裝，非常適合中國(guó)國(guó)情。

1.10 基于關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)選擇

如需選取新的 ELISA 試劑盒，首先需要仔細(xì)評(píng)估檢測(cè)性能。重要參數(shù)包括靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍以及精度，這些在多數(shù)的 ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)中都有體現(xiàn)。對(duì)于典型樣品類型而言，其它參數(shù)對(duì) ELISA 性能更具預(yù)測(cè)價(jià)值。

2. 八大質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

華美生物CUSABIO ELISA試劑盒是試劑配備完整、質(zhì)控嚴(yán)格、經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的即用型ELISA試劑盒。在研發(fā)的過(guò)程中，采取多個(gè)嚴(yán)控的步驟以保證試劑盒的卓越品質(zhì)，保證提供給客戶的產(chǎn)品具有線性、特異性、穩(wěn)定性和靈敏度等的高標(biāo)準(zhǔn)。

本小節(jié)旨在為您解讀不同參數(shù)，以幫助您的樣品找到最合適的 ELISA 試劑盒。

2.1 線性范圍

通過(guò)線性范圍，我們可以計(jì)算出實(shí)際的檢測(cè)樣本值。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

ng/ml	OD1	OD2	Average	Corrected
100	2.839	2.897	2.868	2.718
50	1.968	1.974	1.971	1.821
25	1.144	1.192	1.168	1.018
12.5	0.709	0.733	0.721	0.571
6.25	0.433	0.450	0.441	0.291
3.125	0.303	0.301	0.302	0.152
1.562	0.242	0.223	0.233	0.083
0	0.149	0.151	0.150

2.2 線性

樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測(cè)分析即為線性分析。

線性是試劑盒準(zhǔn)確度和特異性的判定標(biāo)準(zhǔn)。為了評(píng)估測(cè)定的線性，在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品，并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的值的樣品。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例：

血清樣品在1：100,1：200,1：400,1：800下稀釋。

細(xì)胞培養(yǎng)物上清液在1：1,1：2,1：4,1：8下稀釋。

測(cè)試值在80-120％之間并顯示出良好的線性。

	Sample	Serum(n=4)
1:100	Average( %)	91
1:100	Range ( %)	85-97
1:200	Average( %)	97
1:200	Range ( %)	91-103
1:400	Average( %)	93
1:400	Range ( %)	85-95
1:800	Average( %)	95
1:800	Range ( %)	90-100

	Sample	Cell Culture Supernates(n=4)
1:1	Average( %)	97
1:1	Range ( %)	80-100
1:2	Average( %)	95
1:2	Range ( %)	91-110
1:4	Average( %)	90
1:4	Range ( %)	85-95
1:8	Average( %)	96
1:8	Range ( %)	90-100

2.3 最低檢測(cè)限

最低檢測(cè)限是靈敏度的測(cè)試指標(biāo)。由使用的抗體效價(jià)等決定的，在研發(fā)過(guò)程中，一般會(huì)優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測(cè)結(jié)果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測(cè)限越低，靈敏度越高。

2.4 精確度

CV (%) 或變異系數(shù)代表了測(cè)定的一致性，即同一樣本重復(fù)測(cè)定的符合程度。

一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對(duì)不同濃度的樣本進(jìn)行定量檢測(cè)，需要盡量降低批次差異帶來(lái)的系統(tǒng)誤差，保證相同樣本結(jié)果的重復(fù)性。

應(yīng)考慮兩種類型的精度：批內(nèi)精確度和批間精確度。

批內(nèi)精確度：主要指一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)不同孔之間的可重復(fù)性。

在一個(gè)平板上測(cè)試三個(gè)已知濃度的樣品20次，以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<8％。

批間精確度：主要指不同實(shí)驗(yàn)間結(jié)果的可重復(fù)性。

在20個(gè)測(cè)定中測(cè)試三個(gè)已知濃度的樣品以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<10％。

	Intra-Assay Precision			Inter-Assay Precision
Sample	1	2	3	1	2	3
n	20	20	20	20	20	20
Mean(ng/ml)	13.215	12.894	13.438	12.897	13.109	12.963
SD	0.63	0.37	0.53	1.10	0.81	1.00
CV(%)	4.75	2.847	3.931	8.562	6.145	7.741

2.5 特異性

特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。

CUSABIO選擇具有高特異性的原料，以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性，分析交叉反應(yīng)和干擾，確認(rèn)只能識(shí)別和檢測(cè)目標(biāo)分析物。

2.6 回收率

回收率=靶蛋白的測(cè)定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%

它反映了樣品分析過(guò)程中分析物的損失程度，回收率越高，準(zhǔn)確度越高。

回收實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)試劑盒是否受干擾因子的影響，以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對(duì)照，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素，ADP ELISA試劑盒）為例的回收率。

Sample Type	Average(%)	Range(%)
Serum (n=5)	95	89-98
EDTA plasma (n=4)	97	90-100

2.7 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性越好，存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)。

通常采用加速降解的方法來(lái)推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月，實(shí)際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞3-7天后，然后檢測(cè)上述指標(biāo)，觀察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗(yàn)，來(lái)衡量有效期，對(duì)于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗(yàn)相結(jié)合的方法。

將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測(cè)定板在37℃下熱損傷測(cè)試7天，然后與在4℃下儲(chǔ)存的原料進(jìn)行比較。 7天后，OD值≤30％，這是合格的。